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皖儀高效液相色譜法測定食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑5＇-單磷酸尿苷的含量

方案概述

前言：

5＇-單磷酸尿苷作為核苷酸類物質(zhì)，是生物體內(nèi)核酸代謝的關(guān)鍵中間體，也是哺乳動物乳汁中含量最豐富的核苷酸，尤其在幼崽生長發(fā)育過程中對尿苷酸的需求顯著高于其他核苷酸。近年來，研究發(fā)現(xiàn)尿苷酸不僅參與能量代謝和RNA合成，還能通過調(diào)控細(xì)胞信號通路增強(qiáng)腸道屏障功能，并與脂溶性維生素協(xié)同作用，促進(jìn)營養(yǎng)吸收和免疫功能。在嬰幼兒配方食品和畜禽飼料中，尿苷酸常作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑添加，其純度與含量直接影響產(chǎn)品的營養(yǎng)價值和安全性。

本次實驗參考《GB 1903.69-2024 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑 5＇-單磷酸尿苷》，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測器進(jìn)行檢測。實驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適用性測試，各化合物峰型良好，理論塔板數(shù)高，分離度在2.0以上，滿足實驗要求。5＇-單磷酸尿苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及有關(guān)物質(zhì)保留時間重復(fù)性均在0.2%以下，峰面積重復(fù)性均在0.3%以下，重復(fù)性較好。有關(guān)物質(zhì)靈敏度溶液測試5＇-單磷酸尿苷主峰信噪比遠(yuǎn)大于3，滿足實驗要求。試樣測試結(jié)果均正常。以上數(shù)據(jù)均滿足標(biāo)準(zhǔn)方法對于儀器的要求。

關(guān)鍵詞：食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑；5＇-單磷酸尿苷；核苷酸；高效液相色譜。

1.儀器設(shè)備及試劑

1.1 高效液相色譜配置清單

表1 儀器配置清單表

序號	名稱	數(shù)量
1	LC3200液相色譜系統(tǒng)	1臺
2	P3210B 二元高壓梯度泵	1臺
3	CT3400 柱溫箱	1臺
4	AS3210 自動進(jìn)樣器	1臺
5	UV3210 紫外檢測器	1臺
6	SmartLab CDS 2.0色譜使用工作站	1套
7	Nova Element AQC18柱5μm 4.6x250mm	1個

1.2 試劑及標(biāo)準(zhǔn)品清單

表2 試劑及標(biāo)品清單表

序列	試劑及標(biāo)準(zhǔn)品	純度
1	5＇-單磷酸尿苷	96.2%
2	尿苷	98.0%
3	尿嘧啶	98.0%

1.3 實驗材料及輔助設(shè)備

超聲波清洗機(jī)；

渦旋混合器。

2.實驗方法條件

色譜柱：Nova Element AQC18柱5μm 4.6x250mm。

3.實驗結(jié)果

3.1系統(tǒng)適用性測試

系統(tǒng)適用性測試顯示，目標(biāo)峰峰型良好，理論塔板數(shù)高，周圍無雜峰干擾，滿足實驗要求。

圖1 5＇-單磷酸尿苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液測試色譜圖

表3 5＇-單磷酸尿苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液測試結(jié)果

化合物	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	峰高	拖尾因子	理論塔板數(shù)
5＇-單磷酸尿苷	5.559	322.525	55.643	1.130	23689

3.2 重復(fù)性測試

連續(xù)進(jìn)樣6次5＇-單磷酸尿苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，保留時間重復(fù)性為0.085%；峰面積重復(fù)性為0.191%，小于標(biāo)準(zhǔn)要求2.0%，滿足實驗要求。

圖2 維生素A、D、E化合物線性結(jié)果

表4 5＇-單磷酸尿苷重復(fù)性測試結(jié)果

化合物	保留時間（min）	峰面積(mAU*s)
化合物	保留時間（min）	峰面積(mAU*s)
5＇-單磷酸尿苷	5.559	322.525
	5.559	323.013
	5.559	323.958
	5.561	322.753
	5.568	323.072
	5.569	322.141
RSD（%）	0.085	0.191

3.3 試樣測試

由5＇-單磷酸尿苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（20mg/L）測試峰面積為322.525，試樣溶液測試峰面積為274.211，通過外標(biāo)法計算可知，試樣中5＇-單磷酸尿苷的含量為17mg/L。

圖3 試樣測試譜圖

表5 試樣測試結(jié)果

化合物	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	峰高	信噪比	理論塔板數(shù)
5＇-單磷酸尿苷	5.568	274.211	47.321	14710.024	24266

3.4 有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適應(yīng)性測試

有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性溶液測試顯示，各化合物峰型良好，理論塔板數(shù)高，分離度在2.0以上，滿足實驗要求。

表6 5＇-單磷酸尿苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液測試結(jié)果

圖4 試樣測試譜圖

化合物	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	峰高	拖尾因子	理論塔板數(shù)
5＇-單磷酸尿苷	5.570	326.631	8.682	1.121	24708
尿嘧啶	7.097	839.625	28.844	1.033	18284
尿苷	17.367	446.693	n.a.	0.995	19136

3.5 有關(guān)物質(zhì)重復(fù)性測試

連續(xù)進(jìn)樣6次系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，5＇-單磷酸尿苷、尿嘧啶、尿苷的保留時間重復(fù)性分別為0.031%、0.058%、0.102%；峰面積重復(fù)性分別為0.243%、0.134%、0.134%，滿足實驗要求。

圖5 有關(guān)物質(zhì)重復(fù)性測試

表7 有關(guān)物質(zhì)保留時間重復(fù)性測試結(jié)果

化合物	5＇-單磷酸尿苷	尿嘧啶	尿苷
保留時間（min）	5.570	7.097	17.367
	5.573	7.092	17.371
	5.571	7.089	17.360
	5.570	7.093	17.380
	5.570	7.091	17.363
	5.574	7.100	17.408
RSD（%）	0.031	0.058	0.102

表8 有關(guān)物質(zhì)峰面積重復(fù)性測試結(jié)果

化合物	5＇-單磷酸尿苷	尿嘧啶	尿苷
峰面積	326.631	839.625	446.693
	326.175	841.410	447.261
	326.126	841.330	447.299
	327.412	842.394	448.319
	327.832	841.747	447.324
	327.850	842.911	448.083
RSD（%）	0.243	0.134	0.134

3.6 有關(guān)物質(zhì)靈敏度測試

有關(guān)物質(zhì)靈敏度溶液測試5＇-單磷酸尿苷主峰信噪比遠(yuǎn)大于3，滿足實驗要求。

圖6 有關(guān)物質(zhì)靈敏度溶液測試譜圖

表9 有關(guān)物質(zhì)靈敏度溶液測試結(jié)果

化合物	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	峰高	信噪比	理論塔板數(shù)
5＇-單磷酸尿苷	5.573	26.797	4.638	949.156	24519

3.7 有關(guān)物質(zhì)對照及試樣溶液測試

由對照溶液（17mg/L）測試峰面積為275.856，試樣溶液測試除5＇-單磷酸尿苷其他雜質(zhì)峰面積和為38.021，通過外標(biāo)法計算可知，試樣中雜質(zhì)的含量為2.343mg/L。

圖7 有關(guān)物質(zhì)對照溶液測試譜圖

表10 有關(guān)物質(zhì)對照溶液測試結(jié)果

化合物	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	峰高	信噪比	理論塔板數(shù)
5＇-單磷酸尿苷	5.572	275.856	47.414	14576.232	24512

圖8 有關(guān)物質(zhì)試樣溶液測試譜圖

表11 有關(guān)物質(zhì)試樣溶液測試結(jié)果

化合物	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	峰高	信噪比	理論塔板數(shù)
1	3.847	7.952	1.412	433.935	11473
2	4.178	4.358	0.710	218.248	11310
5＇-單磷酸尿苷	5.548	12576.642	1964.994	603778.520	19668
尿嘧啶	7.093	218.727	26.939	8277.393	18342
尿苷	17.355	2810.266	145.230	44624.340	19058