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方案概述

前言：

知母，是百合科植物知母的干燥根莖。其適應(yīng)性強(qiáng)，多生于干旱山坡、草原或沙地，喜疏松沙壤土，耐寒抗旱，我國河北、山西等地分布廣泛。其主治熱病煩渴、肺熱燥咳、陰虛燥咳、骨蒸潮熱及內(nèi)熱消渴等癥，亦可用于腸燥便秘、陰虛火旺之證。具有清熱瀉火、生津潤燥、滋陰降火之功效。在現(xiàn)行《中國藥典》中，對知母的顯微特征、薄層色譜鑒別、水分和總灰分等檢查項目有明確規(guī)范，確保其藥用質(zhì)量。在2025版《中國藥典》修訂草案中，新增了對知母中芒果苷及新芒果苷的定量測定方法，以更精準(zhǔn)地控制其有效成分含量，推動了藥材的標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)用。

本次實驗參考了2025年版《中國藥典》知母的修訂草案公示稿，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測器進(jìn)行檢測。實驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適用性測試，目標(biāo)峰周圍無雜峰，芒果苷峰理論塔板數(shù)遠(yuǎn)高于藥典要求6000，滿足試驗要求。對照品新芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.047%，峰面積重復(fù)性為0.139%，芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.094%，峰面積重復(fù)性為0.151%。供試品新芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.092%，峰面積重復(fù)性為0.284%，芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.171%，峰面積重復(fù)性為0.312%。含量測試供試品中新芒果苷和芒果苷的含量共計為1.38%，滿足于藥典要求的不少于1.20%。以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法對于儀器的要求。

關(guān)鍵詞：知母；新芒果苷；芒果苷；高效液相色譜法；紫外檢測器。

1.實驗方法

1.1 儀器配置

表1高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

序號	名稱	數(shù)量
1	LC3200系列高效液相色譜儀	1
2	P3210B二元高壓梯度泵	1
3	UV3210 紫外檢測器	1
4	CT3400全溫度柱溫箱	1
5	AS3210全自動進(jìn)樣器	1

1.2 實驗材料及輔助設(shè)備

乙腈：色譜純；

甲醇：色譜純；

磷酸：優(yōu)級純；

新芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品；

芒果苷標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3 測試條件

表2 高效液相色譜條件

色譜柱	Nova Atom SC18 4.6×250mm 5μm色譜柱
流速	1mL/min
柱溫	40 ℃
流動相	A相:乙腈 B相：0.2%磷酸溶液
波長	258nm
進(jìn)樣量	10μL

表3 流動相洗脫程序

時間（min）	A相	B相
0	7	93
7	7	93
10	13	87
26	13	87
26.1	7	93
30	7	93

1.4 溶液配制

1.4.1對照品溶液

取新芒果苷對照品、芒果苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含新芒果苷75μg、芒果苷50μg的混合溶液，即得。

1.4.2供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）0.2009g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘（功率400W，頻率40kHz），放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性

圖1 對照品測試譜圖

表4 對照品測試數(shù)據(jù)

名稱	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	理論塔板數(shù)
新芒果苷	15.318	2224.363	148229
芒果苷	19.386	2474.023	70805

說明：由上述表格可見，芒果苷峰理論塔板數(shù)遠(yuǎn)高于藥典要求6000，目標(biāo)峰周圍無雜峰，滿足系統(tǒng)適用性試驗要求。

2.2 對照品重復(fù)性測試

圖2 6針對照品測試色譜圖

表5 6針對照品測試數(shù)據(jù)

化合物名	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)
新芒果苷	15.318	2224.363
	15.312	2228.227
	15.307	2225.266
	15.312	2228.537
	15.300	2229.382
	15.300	2233.026
平均值	15.308	2228.134
RSD（%）	0.047	0.139

表6 6針對照品測試數(shù)據(jù)

化合物名	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)
芒果苷	19.386	2474.023
	19.372	2479.455
	19.358	2483.052
	19.360	2484.505
	19.343	2482.377
	19.337	2482.02
平均值	19.359	2480.905
RSD（%）	0.094	0.151

說明：由上表數(shù)據(jù)可知，對照品新芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.047%，峰面積重復(fù)性為0.139%，芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.094%，峰面積重復(fù)性為0.151%。

圖3 6針供試品測試色譜圖

表7 6針供試品測試數(shù)據(jù)

化合物名	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)
新芒果苷	15.351	1144.155
	15.343	1143.313
	15.337	1145.332
	15.328	1146.515
	15.320	1152.317
	15.314	1144.678
平均值	15.332	1146.052
RSD（%）	0.092	0.284

表8 6針供試品測試數(shù)據(jù)

化合物名	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)
芒果苷	19.479	835.932
	19.459	833.603
	19.440	830.696
	19.424	829.463
	19.407	829.723
	19.389	830.174
平均值	19.433	831.598
RSD（%）	0.171	0.312

說明：由上表數(shù)據(jù)可知，供試品新芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.092%，峰面積重復(fù)性為0.284%，芒果苷保留時間重復(fù)性RSD為0.171%，峰面積重復(fù)性為0.312%。

2.3 知母測試結(jié)果

圖4 供試品測試色譜圖

表9 供試品測試數(shù)據(jù)

名稱	保留時間(min)	峰面積(mAU*s)	理論塔板數(shù)
新芒果苷	15.351	1144.155	145885
芒果苷	19.479	835.932	70449

說明：由對照品進(jìn)樣10μL測試新芒果苷75μg/mL峰面積為2224.363，芒果苷50μg/mL峰面積為2474.023，供試品進(jìn)樣10μL新芒果苷峰面積為1144.155，芒果苷峰面積為835.932，稱樣量0.2009g，定容體積50mL，計算可知供試品中新芒果苷和芒果苷的含量共計為1.38%，滿足于藥典要求的不少于1.20%。