方案概述
前言:
苘麻子為錦葵科植物苘麻的種子。別名青麻子。種子三角狀腎形,種皮堅(jiān)硬。其中,亞油酸是苘麻子中的重要活性成分之一,具有降低膽固醇、預(yù)防心血管疾病、促進(jìn)新陳代謝等藥理作用。因此,準(zhǔn)確測(cè)定苘麻子中亞油酸含量對(duì)保證其質(zhì)量和藥效具有重要意義。據(jù)最新的《國(guó)家藥典委員會(huì)關(guān)于苘麻子國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案的公示》,新標(biāo)準(zhǔn)草案新增了苘麻子藥材中亞油酸的含量測(cè)定方法,并對(duì)苘麻子中亞油酸含量的限度范圍進(jìn)行了規(guī)定(本品按干燥品計(jì)算,含亞油酸不得少于0.30%。)
本篇文章參考了最新的《國(guó)家藥典委員會(huì)關(guān)于苘麻子國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案的公示》中修訂的含量測(cè)定項(xiàng)下高效液相色譜法色譜條件,采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測(cè)器對(duì)苘麻子樣品中亞油酸進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,亞油酸色譜峰的理論塔板數(shù)高于2000,滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL)重復(fù)進(jìn)樣6次,保留時(shí)間RSD值為0.068%,峰面積RSD值為0.355%,重復(fù)性較好。亞油酸檢出限為0.0133μg/mL,定量限為0.0442μg/mL。取苘麻子作為測(cè)試樣品,根據(jù)亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰保留時(shí)間進(jìn)行定性,對(duì)苘麻子樣品中亞油酸進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,苘麻子含亞油酸0.59 %,滿足新標(biāo)準(zhǔn)中大于0.30 %的要求。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足對(duì)苘麻子藥材中亞油酸含量檢測(cè)需求。
關(guān)鍵詞:亞油酸;高效液相色譜法;紫外檢測(cè)器;苘麻子。
1.實(shí)驗(yàn)方法
1.1 儀器配置
表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單
序號(hào) | 名稱 | 數(shù)量 |
1 | LC3200系列高效液相色譜儀 | 1 |
2 | P3200B二元高壓梯度泵 | 1 |
3 | UV3200 紫外-可見光檢測(cè)器 | 1 |
4 | CT3200全溫度柱溫箱 | 1 |
5 | AS3200全自動(dòng)進(jìn)樣器 | 1 |
1.2 實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備
亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品;
磷酸;
甲醇:色譜純;
乙腈:色譜純;
分析天平;
微孔濾膜:孔徑0.22μm;
超聲波清洗機(jī)。
1.3 測(cè)試條件
表2實(shí)驗(yàn)色譜條件
實(shí)驗(yàn)色譜條件 | |||
色譜柱 | 諾譜Nova Atom C18色譜柱 | ||
流速 | 1.0mL/min | ||
柱溫 | 30℃ | 檢測(cè)波長(zhǎng) | 203nm |
進(jìn)樣量 | 10μL | ||
流動(dòng)相 | 乙腈:0.1%磷酸溶液=90:10 | ||
1.4 溶液配制
1.4.1亞油酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(200μg/mL)
取亞油酸對(duì)照品適量,精密稱定,用甲醇溶解,混勻,使其濃度為200μg/mL,2-8℃避光保存。
1.4.2亞油酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(20μg/mL)
準(zhǔn)確稱取亞油酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(200μg/mL),用甲醇溶解,混勻,使其濃度為20μg/mL,2-8℃避光保存。
2.結(jié)果與討論
2.1系統(tǒng)適用性

圖1 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL)色譜圖
表3 系統(tǒng)適用性溶液色譜參數(shù)
化合物名 | 保留時(shí)間(min) | 峰面積 | 理論塔板數(shù) |
亞油酸 | 8.059 | 4378.687 | 16215 |
說明:由上述譜圖可見,亞油酸色譜峰的理論塔板數(shù)高于2000,滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。
2.2 重復(fù)性

圖3 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL)重復(fù)性色譜圖
表4亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL)重復(fù)性色譜參數(shù)
序號(hào) | 樣品名稱 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | 理論塔板數(shù) |
1 | 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL) | 8.059 | 4378.687 | 16215 |
2 | 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL) | 8.062 | 4422.299 | 15936 |
3 | 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL) | 8.059 | 4409.822 | 16126 |
4 | 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL) | 8.073 | 4408.610 | 16081 |
5 | 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL) | 8.065 | 4406.289 | 16071 |
6 | 亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL) | 8.068 | 4389.956 | 16234 |
平均 | N/A | 8.064 | 4402.610 | N/A |
RSD(%) | N/A | 0.068 | 0.355 | N/A |
說明:亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL)重復(fù)進(jìn)樣6次,保留時(shí)間RSD值為0.068%,峰面積RSD值為0.355%,重復(fù)性較好。
2.3 檢出限

圖4 亞油酸溶液(10μg/mL)色譜圖
表5 亞油酸溶液(10μg/mL)色譜參數(shù)
化合物名 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | 理論塔板數(shù) | 信噪比 | 檢出限 (μg/mL) | 定量限 (μg/mL) |
亞油酸 | 7.898 | 226.121 | 16354 | 2261.172 | 0.0133 | 0.0442 |
說明:以信噪比(S/N)為3確定檢出限(LOD),亞油酸檢出限為0.0133μg/mL。以信噪比(S/N)為10確定定量限(LOQ),亞油酸定量限為0.0442μg/mL。
2.4 樣品測(cè)試
取苘麻子樣品粉末(過二號(hào)篩)約 1 g,精密稱定,置棕色具塞錐形瓶中,精密加入甲醇 25ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率 400W, 頻率 40 kHz)45分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,精密吸取供試品溶液10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定。

圖5 苘麻子樣品色譜圖
表6 苘麻子樣品亞油酸色譜峰色譜參數(shù)
化合物名 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | 理論塔板數(shù) | 亞油酸濃度 |
亞油酸 | 8.025 | 5184.171 | 16215 | 0.59% |
說明:根據(jù)亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行定性,對(duì)苘麻子樣品中亞油酸進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,苘麻子含亞油酸0.59 %,滿足新標(biāo)準(zhǔn)中大于0.30 %的要求。
2.5 注意事項(xiàng)
(1) 亞油酸長(zhǎng)期暴露空氣中易氧化變硬,制備好的亞油酸相關(guān)溶液應(yīng)于2-8℃避光保存;
(2) 在制備相關(guān)溶液時(shí)需要注意佩戴好實(shí)驗(yàn)室防護(hù)用品。
3.結(jié)論
本篇文章參考了最新的《國(guó)家藥典委員會(huì)關(guān)于苘麻子國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)草案的公示》中修訂的含量測(cè)定項(xiàng)下高效液相色譜法色譜條件,采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測(cè)器對(duì)苘麻子樣品中亞油酸進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,亞油酸色譜峰的理論塔板數(shù)高于2000,滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。亞油酸對(duì)照溶液(200μg/mL)重復(fù)進(jìn)樣6次,保留時(shí)間RSD值為0.068%,峰面積RSD值為0.355%,重復(fù)性較好。亞油酸檢出限為0.0133μg/mL,定量限為0.0442μg/mL。取苘麻子作為測(cè)試樣品,根據(jù)亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰保留時(shí)間進(jìn)行定性,對(duì)苘麻子樣品中亞油酸進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,苘麻子含亞油酸0.59 %,滿足新標(biāo)準(zhǔn)中大于0.30 %的要求。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足對(duì)苘麻子藥材中亞油酸含量檢測(cè)需求。
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